稳定表达猪水疱病病毒p1基因的pk-15细胞系的建立

？从猪水疱病全长感染性cdna中，应用pcr技术扩增到svdv结构蛋白p1基因，并在目的片段的5′端引入kozak序列(kozak,1987)，定向克隆于逆转录病毒载体pbabepuro。经pcr、酶切和序列分析鉴定，获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pvsv-g共转染gp2-293细胞，收获假型病毒，在polybrene的介导下感染pk-15细胞，嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞，发现在不同代次的细胞中均有svdvp1蛋白表达，而且表达的蛋白可被svd阳性血清所识别；同时应用pcr技术，可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到svdp1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达svdp1蛋白，而且可携带外源基因进行传代，具有良好的遗传稳定性。