水泡性口炎病毒血清型特异lux实时荧光rt-pcr检测方法的建立

？采用lux荧光核酸扩增技术原理，以水泡性口炎病毒（vsv）nj、ind型ns基因为模板分别设计并合成单标记lux荧光引物，建立血清型特异的vsv荧光rt-pcr检测方法。试验表明，两种型特异的lux荧光rt-pcr能分别特异地鉴定vsv血清型，对口蹄疫、猪水泡病等病毒以及对照细胞、健康动物组织rna样品的检测结果均为阴性。对比检测试验表明，lux荧光rt-pcr的检测敏感性比常规rt-pcr提高达10倍以上，对vsv细胞增殖病毒液的检测灵敏度可达1tcid50。对人工感染豚鼠样品以及临床样品的检测试验证实，该lux荧光rt-pcr可有效检测到人工感染动物组织以及进口牛临床样品中的水泡性口炎病毒，并能鉴定感染病毒血清型。所报道的检测方法，包括样品核酸提取、lux荧光rt-pcr以及熔解曲线分析，可在3h内完成。