rnai抑制prp表达载体的构建及其在prp功能研究中的初步应用

？本文旨在构建有效抑制朊蛋白（prionprotein，prp）表达的重组质粒，并以此为工具控制prp表达，从而探讨prp对细胞sod活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段（shprp），退火后与表达载体pg-super（hairpinsirnaexpressingvector）定向连接，构建重组质粒pg-super-shprp。对重组子进行pcr鉴定，测序正确后，脂质体法转染c6细胞，采用实时荧光定量rt-pcr检测prpmrna的表达水平，以验证pg-super-shprp的抑制效率；结果表明：重组质粒pg-super-shprp构建成功，且显著降低c6细胞prpmrna表达（p<0.05），抑制效率为34.2%。利用pg-super、pg-super-shprp分别转染c6细胞，并检测细胞sod总活性及sod表达水平，探讨prp对细胞sod活性的影响及其作用机制，结果表明prp促进细胞sod的活性（p<0.01），但对细胞sod的表达量无影响，即prp对sod活性的促进作用与sod1的表达量无关。本研究在成功构建了prp的rna干扰表达质粒的基础上，利用此质粒，在细胞水平上揭示了prp对细胞sod活性的促进作用。