鸡sp-mrna探针制备及其在inr的杂交反应

？应用rt-pcr方法从鸡脑中扩增p物质（substancep，sp）基因片段，将其连接于pgmt质粒并转化大肠杆菌，挑取阳性克隆，测序鉴定为目的片段。分别利用pgm-t质粒中t7和sp6启动子及t7和sp6rna聚合酶，以线性化的sp/pgm-t为模板转录合成正、反义dig标记rna探针。通过原位杂交（insituhybridizationhistochemistry，ishh）技术，用新合成的探针探查sp-mrna在鸡肠remak神经(intestinalnerveofremak,inr)中的分布情况。结果表明，鸡inr中sp-mrna阳性神经元数量众多，在空、回肠段和直肠段inr中的阳性细胞分别占总神经元的82.98%和98.01%。阳性细胞呈多突起的椭圆形或梭形，在inr神经节中较有规律地层状分布或成群出现，在神经节边缘分布更为密集，并且在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明inr中大部分神经元有sp的mrna转录，这些神经元作为外来的sp神经纤维可以支配到肠道和输卵管。