猪生长分化因子11的原核表达及抗体制备

？本研究旨在获得猪gdf11的特异性抗体，以便于进一步研究猪gdf11的功能。对猪gdf11的编码区进行了克隆、表达载体的构建和转化、原核诱导表达和纯化以及将gdf11注射到小鼠中并分离抗体。从猪胚肾中分离总rna，经rtpcr扩增得到猪gdf11基因的编码区，插入pmd18t载体中。再经限制性内切酶bamhⅰ和ecorⅰ双酶切，将回收的gdf11酶切片段插入原核表达载体pgex4t2中，获得重组原核表达质粒pgex4t2gdf11。重组质粒经测序鉴定后转化大肠杆菌bl21(de3),并经iptg诱导产生了65ku的gstgdf11融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切，分离纯化出42ku左右的gdf11蛋白；然后注射小鼠，制备了多克隆抗体，其滴度最高可达1∶25600，而且特异性好，表明得到了猪gdf11的多克隆抗体。