猪mstn前肽定点诱变载体在c2c12细胞中的表达

？本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的mstn前肽基因，构建真核定点诱变载体，并通过转染c2c12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的dna作为模板，pcr扩增得到含第1个内含子的mstn前肽基因，扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了egfp基因的pegfpn1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸，获得定点诱变载体pegfp()n1promstnd76a，并瞬时转染c2c12细胞。转染48h后，通过rtpcr和realtimepcr方法检测目的基因的表达情况。结果表明：本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的mstn前肽基因，并对该基因进行定点诱变修饰，构建了真核表达载体，转染后其前体mrna能在c2c12细胞中进行正确剪接，目的基因mrna表达水平较高。这为猪mstn前肽基因在体内表达的研究奠定基础，并为制备转基因猪提供有用的分子材料。