表达牛源犬新孢子虫ncsrs2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析

？为构建牛源犬新孢子虫ncsrs2基因重组腺病毒，并分析其免疫原性，pcr扩增牛源犬新孢子虫ncsrs2基因，构建克隆质粒pmd18tncsrs2、重组腺病毒穿梭质粒pcr259ncsrs2及表达质粒transposeadncsrs2，脂质体介导转染qbihek293细胞，包装重组腺病毒ad5ncsrs2，pcr检测重组腺病毒ncsrs2基因，ifat和westernblotting检测ncsrs2基因在qbihek293细胞中的表达，测定病毒滴度后，收集病毒液免疫balb/c小鼠，间接elisa检测小鼠血清igg抗体水平。结果显示，扩增的牛源犬新孢子虫ncsrs2基因大小为1227bp，与genbank中发表的ncsrs2（af061249）核苷酸序列相似性为99%；重组腺病毒ad5ncsrs2在293细胞中包装成功，表达蛋白的相对分子质量为43ku，具有较好的反应原性；测得重组腺病毒ad5ncsrs2滴度为109tcid50·ml-1，间接elisa检测二免后3周balb/c小鼠血清中igg抗体效价达1∶2048。本研究成功构建了具有良好免疫原性的重组腺病毒ad5ncsrs2，为牛源犬新孢子虫ncsrs2基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。