鹅垂体特异性转录因子荧光素酶报告基因重组体的构建和鉴定

？为研究垂体特异性转录因子(pituitarytranscriptionfactor1,pit1)启动子转录调控机制，将获得的pit1基因的启动子，插入荧光素酶报告基因载体中，构建pit1基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。本研究利用染色体步移技术扩增鹅pit1基因的启动子，定向亚克隆至荧光素酶表达载体pgl3basic中，构建含有正确目的基因的报告基因重组体pgl3pit1，并通过限性内切酶酶切、pcr及测序进行鉴定。通过酶切鉴定及基因测序证明，所克隆的基因产物与预期结果一致，序列无碱基突变。结果，成功构建了含有pit1启动子基因序列的荧光素酶报告基因真核表达载体，为下一步分析该启动子活性及转录调控机理奠定基础。