猪圆环病毒2型cap蛋白的表达及在elisa中的初步应用

？本研究旨在建立以pcv2cap蛋白为包被抗原的间接elisa检测方法，构建猪圆环病毒2型（pcv2）orf2基因原核表达质粒pet32aorf2并转化至rosetta菌，在1.0mmol·l-1iptg和37℃条件下诱导下，cap蛋白获得高效表达，westernblot检测证实其具有免疫反应活性，以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接elisa方法。结果表明抗原最适包被浓度为2.16μg·ml-1；血清最佳稀释度为1∶40；抗原最佳包被条件为4℃过夜；最佳封闭条件为1%bsa37℃1h；血清反应时间为37℃30min；酶标二抗最适作用时间为37℃45min；底物最佳反应条件为37℃显色15min。用该方法对四川省184份猪血清样品进行检测，总阳性率为80.98%(149/184)，与商品化的pcv2elisa试剂盒得到的结果基本一致。本试验成功建立了pcv2血清抗体间接elisa方法，具有较高的敏感性和特异性，可用于大规模的血清学检测。