徐淮山羊lpl基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

？旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(lpl)基因的cdna，并通过egfp融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。本研究通过rtpcr方法克隆徐淮山羊lpl基因cdna，并初步进行生物信息学分析，构建含有增强型绿色荧光蛋白(egfp)报告基因的融合表达载体pegfpc1lpl。聚乙烯亚胺(pei)介导pegfpc1lpl转染nih3t3细胞，48h后在荧光倒置显微镜下观察，并用rtpcr方法检测lplmrna在细胞内的表达。结果，成功克隆出山羊lpl基因1530bp长的cdna，完整阅读框大小为1437bp，共编码478个氨基酸，genbank登录号为gu082383。信号肽区域预测结果表明lpl蛋白含有一小段信号肽序列，其可能性为100%。信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间，其可能性达到65.9%。成功构建融合表达载体pegfpc1lpl，并且rtpcr显示转染后lpl在mrna水平上表达明显。egfplpl融合蛋白定位在nit3t3细胞外和细胞膜部分。结果表明，首次成功克隆出徐淮山羊lpl基因cdna；重组质粒pegfpc1lpl构建成功，并在nih3t3细胞中明显表达。