逆转录病毒载体介导的t7rna聚合酶在猪源细胞pk15及sk6中的稳定表达

？本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将t7rna聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含t7rna聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pbabepuro/t7。将pbabepuro/t7与水泡性口炎病毒载体pvsv-g共转染gp2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在polybrene的介导下分别感染pk15和sk6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的t7rna聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中t7rna聚合酶基因的表达及其活性。结果表明t7rna聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的t7rna聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱。免疫荧光检测发现所表达的t7rnap蛋白具有良好的反应原性。本研究表明t7rna聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具。