鸡胚盲肠上皮细胞的传代培养

？本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性，为e-tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。分别用胰酶edta联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞，通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式；筛选了传代细胞培养液中l-gln和胰岛素的最佳浓度，通过贴壁差进一步纯化盲肠上皮细胞，探索其合适的培养条件。通过形态学观察、透射电镜、免疫组织化学技术、组织化学技术、糖原染色、流式细胞术的方法对传代细胞特性进行了鉴定。结果表明：胰酶-edta联合消化、15min贴壁差纯化除去成纤维细胞，72.5mg·l-1l-gln、0.05mg·l-1胰岛素和5%fbs的传代细胞培养液更有利于盲肠上皮细胞的生长；经形态学和透射电镜观察，akp、vimentin及pas染色，所培养的传代细胞具有典型的上皮细胞特征，在传代后24~72h盲肠上皮细胞纯度达95%以上，贴壁细胞覆盖率达85%以上；细胞凋亡测定表明，细胞连传5代，活性较好，第6代细胞凋亡率显著增加，贴壁细胞覆盖率降低。本研究提示用该法传代可获得稳定、数量大、活性高、纯度高的鸡胚盲肠上皮细胞。