猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在elisa中的初步应用

？为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法，根据已克隆的戊型肝炎病毒株dq1结构蛋白基因（orf2）的抗原性及水溶性分析，在其序列上设计一对引物，上游引物和下游引物分别带有bamhⅰ、hindⅲ酶切位点，用pcr方法扩增，获得369bp大小的相应片段，位于orf2128-497bp处。将扩增片段克隆到pet-32a构建了原核表达载体pet32a-dq01，经测序证明该片段正确插入。将pet32a-dq01转化bl21并诱导表达，sds-page结果显示表达蛋白大小为33ku，western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物活性，将表达蛋白作为诊断抗原，对反应条件进行优化，初步建立了elisa诊断方法。