人类α-actin启动子真核表达载体的构建及应用

？利用pcr技术克隆了人类α-actin基因的启动子（约450bp），尝试用去掉启动子的pegfpn1作为框架结构，成功构建了真核表达载体pegfp-n1-α-actin-p。应用lipofectamine2000将所构建的pegfp-n1-α-actin-p转染入小鼠es细胞。通过比较，发现在本实验室条件下，质粒dna浓度以3.0~5.0μg/ml，转染时间约在2~3h最佳。200μg/ml的g418较适宜于靶细胞的转染与筛选。得到表达心肌α-actin和gfp的小鼠es细胞，基本维持小鼠es细胞的形态。pcna染色结果表明，转染后的小鼠es细胞具有增殖能力。α-actin抗体免疫组化染色结果表明，转染后细胞表达α-actin和gfp，揭示构建的真核表达载体pegfp-n1-α-actin-p转染小鼠es细胞，可能促进其向心肌细胞分化并对其筛选。