多重pcr检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用

？参照genbank发表的序列，在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16srrna与23srrna之间的区域设计了3对引物，参照念珠菌和隐球菌的18srrna的序列设计1对引物，建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重pcr方法。参照skladny的方法制备模拟了细菌感染临床标本。结果表明：本试验建立的多重pcr方法具有较好的特异性，多重pcr方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为104cfu/ml,检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为102cfu/ml、103cfu/ml和103cfu/ml。通过对采自临床型乳腺炎（46个）和隐性乳腺炎（167个）动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重pcr方法进行检测，多重pcr对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率（p<0.01），但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著（p>0.05）。