基于重组猪囊虫18ku抗原的间接elisa方法的建立

？利用反转录聚合酶链式反应(rtpcr)从猪囊尾蚴中克隆到18ku蛋白基因，将扩增产物与pgemteasy载体连接后测序分析。将目的基因亚克隆至表达载体，构建重组质粒pgexce18，经转化大肠杆菌bl21（de3）后诱导表达，用sdspage和westernblot分析表达产物。表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接elisa方法。结果表明，18ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达，表达产物约为35ku的融合蛋白，并能被猪囊虫感染血清识别。经薄层扫描分析，表达量占菌体蛋白总量的28%。与商品化elisa试剂盒平行检测178份阳性血清样品，二者的符合率为98.83%，说明建立的重组蛋白elisa方法可用于猪囊虫病的诊断。