小尾寒羊cib1基因全长cdna克隆及原核表达

？本研究旨在克隆小尾寒羊钙粘和蛋白1(calciumandintegrinbindingprotein1,cib1)基因cdna全长，并在原核载体中表达。参照已发表的cib1基因的核苷酸序列，设计了1对特异性引物，采用rtpcr法，从小尾寒羊睾丸组织中扩增获得cib1基因全长cdna。将其克隆到pmd19t载体，并进行测序分析。将该基因编码区重组于融合表达质粒pet32a中，构建了重组原核表达载体(pet32acib1)。将其转化到bl21（de3）plyss宿主菌中，用iptg进行诱导表达。结果表明，克隆的cib1基因cdna与genbank上登录的牛、猪、猕猴、人、小鼠、大鼠、黑猩猩等动物该基因序列的同源性达90%以上，编码氨基酸的同源性在93%以上，并且该序列包含有完整的开放阅读框，大小为576bp。实现了高效特异性融合表达，表达产物的分子质量约为38ku。本研究结果为进一步研究cib1蛋白功能打下良好的基础。