猪圆环病毒2型对体外培养仔猪淋巴细胞nf-κb信号的动态影响

？检测猪圆环病毒2型（pcv2）对体外培养仔猪淋巴细胞核因子-κb（nf-κb）信号的动态影响，探讨pcv2调控仔猪淋巴细胞炎性细胞因子产生与变化的机制。选取5头pcv2和猪繁殖与呼吸综合征病毒（prrsv）血清抗体和抗原阴性的普通断奶仔猪，无菌采集脾脏，分离脾脏细胞制成单个细胞悬液进行体外培养。分为对照组和试验组，试验组每毫升细胞悬液加pcv2病毒（病毒滴度为5×105tcid50·ml－1）悬液200μl；对照组加等量1640细胞培养液，并分别于培养后0、6、12、24h收取悬浮的淋巴细胞。激光共聚焦显微镜检测nf-κb核易位，westernblot检测核蛋白中nf-κb/p65、胞质蛋白中磷酸化抑制性κbα（p-iκbα）含量，电泳迁移率（emsa）法检测nf-κb与dna的结合率。结果如下：淋巴细胞中nf-κb/p65蛋白核易位随着pcv2作用时间的延长而增加；淋巴细胞核中nf-κb/p65蛋白随pcv2作用时间增加逐渐升高，6h后均显著高于同时间对照组（p<0.05）；nf-κb与dna的结合率也随pcv2作用时间增加逐渐升高，pcv2作用6h后均显著高于对照组（p<0.05）；淋巴细胞胞质中的p-iκbα蛋白水平在pcv2作用24h时达到峰值，并且培养6、12和24h均极显著高于同时间对照组（p<0.01）。研究表明pcv2可通过iκb的磷酸化降解途径显著激活仔猪淋巴细胞中nf-κb信号，使其发生核易位并与dna发生结合，从而调控相关炎性细胞因子的表达。