兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

？白细胞介素-10（il-10）是一种多功能的细胞因子，参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达il-10基因，以制备兔il-10多克隆抗体。运用rt-pcr技术从新西兰白兔脾脏总rna中扩增il-10基因，将该基因亚克隆入原核表达载体pet-32a并转入大肠杆菌bl21（de3）中诱导表达获得融合蛋白，融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体，最后分别用间接elisa和westernblot检测抗体的效价和特异性。结果表明：克隆得到了兔il-10基因，大小为537bp，经核苷酸测序与genbank已登录的基因序列（nm_001082045）相似性为99%；重组载体pet-il-10构建成功；sds-page电泳结果显示融合蛋白成功表达；制备的多克隆抗体效价高达1∶56000，且具有很高的特异性。成功实现了兔il-10基因的原核表达，并制备了豚鼠抗兔il-10多克隆抗体，为深入研究兔il-10基因的功能奠定了基础。