稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立

？旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体，筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系，为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用soe-pcr和pcr方法，分别扩增获得筛选标记基因neo-t2a-egfp序列和纤维素酶相关基因的融合序列sp-egx-f2a-bgl1，构建腮腺特异性表达载体ppsp-sp-egx-f2a-bgl1-cmv-neo-t2a-egfp，经pcr、酶切、测序鉴定正确后，通过脂质体转染猪胎儿成纤维细胞，利用g418抗性和绿色荧光蛋白进行稳定筛选，并利用pcr和westernblot进行检测。结果表明，成功构建了带双筛选标记的腮腺特异表达纤维素酶基因的表达载体，并获得稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系。该结果为生产腮腺特异表达纤维素酶的转基因克隆猪研究奠定基础。