小鼠fyn及其多种突变体的载体构建和蛋白生物活性预测分析

？旨在构建小鼠fyn及其多种突变体真核表达载体，预测突变后的蛋白质二级结构和功能改变。克隆小鼠大脑皮质的fyn基因，构建克隆质粒pmd18-t-fynwt，经测序验证后，以pmd18-t-fynwt为模板，针对不同突变位点设计引物，构建不同突变体克隆质粒并验证，将fyn不同的突变体克隆至真核表达载体pcag-mcs，构建真核表达载体pcag-mcs-fyn**，将表达载体转染细胞进行检测，并对其进行生物信息学分析。测序结果显示pmd18-t-fynwt核苷酸序列正确率100%，突变体完全达到预期设计；pcag-mcs-fyn**转染细胞后fyn**表达量明显升高（p<0.01）。结果表明，fyn突变体蛋白质的二级结构与野型相比有很大改变，可能影响其生物活性。