牛ascl2基因印记及dna甲基化状态分析

？为探讨ascl2基因在成年牛不同组织中的印记状态，并揭示dna甲基化在调控ascl2基因印记中的可能作用。本研究首先应用基于核苷酸多态的rt-pcr产物直接测序法对ascl2基因在牛7个组织（心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪）中的表达及印记状态进行了分析，进一步应用亚硫酸氢盐测序法分析牛肺、肝和肾组织中ascl2基因启动子区的等位基因特异的甲基化状态。rt-pcr产物测序结果显示，ascl2基因印记表现出组织特异性，在肺和肝中为单等位基因表达，而在心、脾、肾、肌肉和脂肪5个组织中为双等位基因表达。亚硫酸氢盐测序发现，在ascl2单等位基因表达的肺和肝中，2条亲本链的甲基化水平存在极显著差异（p<0.01），a链的甲基化水平（61.21%、87.28%）显著高于g链（24.70%、25.61%）；而在ascl2双等位基因表达的肾组织中，a链（54.70%）与g链（49.55%）的平均甲基化水平差异不显著（p>0.05）。以上结果表明，ascl2基因启动子区dna的甲基化修饰调控ascl2基因的印记表达。