柔嫩艾美耳球虫真核起始因子5和5a基因的克隆表达及转录动态分析

？旨在研究柔嫩艾美耳球虫（e.tenella）真核起始因子5（eteif5）和5a（eteif5a）的功能，克隆、表达并分析eteif5和eteif5a在e.tenella广东株不同发育阶段的表达量变化。根据e.tenella基因组数据预测的编码序列设计引物，采用rt-pcr方法克隆eteif5和eteif5a的orf，插入酶切位点后连接到原核表达载体pmal-c2x进行诱导表达。提取e.tenella5个发育阶段（/时期）的总rna，使用qrt-pcr检测eteif5和eteif5a转录的动态变化。测序结果表明，克隆获得的eteif5和eteif5aorf全长分别为1248和486bp，各自编码315和161个氨基酸，均在大肠埃希菌表达系统中成功表达。qrt-pcr定量分析显示，eif5和eif5a的mrna在e.tenella不同发育阶段转录量不同，子孢子阶段最高，在孢子化卵囊阶段最低。首次克隆获得了e.tenellaeif5和eif5aorf，揭示eteif5和eteif5amrna的转录量在不同发育阶段有显著差异。试验结果为进一步研究eteif5和eteif5a的功能，从eteif5a合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础。