重组猪表皮生长因子在酿酒酵母中的克隆表达及其生物学活性鉴定

？？猪表皮生长因子（porcineepidermalgrowthfactor，pegf）能够刺激小肠dna合成及细胞增殖，促进肠道发育，从而提高断奶仔猪生产性能及免疫功能等。由此，研发分泌表达猪表皮生长因子的益生菌，用于畜牧生产及临床医学具有重要意义。克隆内江猪乳腺组织egf及酿酒酵母中分泌信号肽mfα，在综合考虑酿酒酵母密码子使用频率和表达效率的基础上，人工合成优化后的内江猪egf基因（syntheticporcineepidermalgrowthfactor，spegf），构建pyes2-mfα-spegf表达载体并在酿酒酵母中成功表达。该重组酿酒酵母invsc1(pyes2-mfα-spegf)表达蛋白spegf进行tricine-sds-page电泳、蛋白质免疫印迹、体外生物学活性检测及断奶sd大鼠体内生物学活性检测。根据rt-pcr和测序结果显示，成功地构建了pyes2-mfα-spegf表达载体并在酿酒酵母中实现表达；在tricine-sds-page电泳及蛋白质免疫印迹中可以分别观察到目的条带及印迹条带；体外生物学活性检测结果显示，invsc1(pyes2-mfα-spegf)表达蛋白spegf对肠上皮细胞具有明显增殖作用（p<0.05）；断奶sd大鼠体内生物学活性检测结果表明，重组酿酒酵母组invsc1(pyes2-mfα-spegf)能促进小肠发育（如绒毛高度、隐窝深度、小肠黏膜总蛋白、总dna及rna含量等）（p<0.05），显著提高其生产性能（如体重、日增重、采食量及饲料转化率）及免疫功能（如iga、igg及igm）等（p<0.05）。本研究成功构建的invsc1(pyes2-mfα-spegf)菌液上清中目的蛋白的表达量约为30mg？l-1，且具有高生物学活性，可以直接用于畜牧生产及临床医学。