猪流行性腹泻病毒coe基因在毕赤酵母中的表达及生物活性分析

？？旨在利用毕赤酵母表达系统表达猪流行性腹泻病毒（pedv）coe蛋白，及研究coe蛋白免疫小鼠后产生抗体的中和病毒的能力。根据pedvs糖蛋白基因设计引物，取患猪流行性腹泻病（ped）的仔猪肠道组织，抽提pedv的总mrna，进行rt-pcr扩增，获得pedv部分保护性抗原基因（coe基因）片段。进一步将coe基因导入毕赤酵母表达载体，构建毕赤酵母表达质粒ppic9k-coe重组质粒，并电转化入酵母感受态细胞gs115中，筛选高拷贝阳性重组菌进行诱导表达。利用sds-page和westernblot分析重组蛋白及其免疫原性，病毒中和试验评价重组蛋白免疫小鼠后血清抗体的病毒中和能力。rt-pcr扩增获得大小为530bp的pedvcoe基因，该基因在毕赤酵母表达载体中能够正确表达，sds-page结果显示毕赤酵母表达的coe蛋白大小在27ku左右，分泌表达量约30mg？l－1。westernblot表明pedvcoe重组蛋白具有反应原性。中和试验结果表明，pedvcoe重组蛋白免疫小鼠后血清中特异性抗体具有中和活性，中和效价为1∶36，而对照则小于1∶2。pedvcoe基因可在毕赤酵母中获得分泌表达，且表达的蛋白具有很好的生物学活性。