鸡传染性喉气管炎病毒gc蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究

？为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体，并研究鸡传染性喉气管炎病毒（iltv）gc蛋白在lmh细胞内的分布及gc蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用，本研究以iltv-ljs09毒株基因组为模板，应用pcr方法扩增gc基因的主要抗原性片段，并克隆至原核表达载体pet-32a（+）构建pet-32a-gc质粒，经iptg诱导表达并纯化，获得his-gc重组蛋白，免疫新西兰大白兔制备抗血清。westernblot结果表明，所制备的兔抗-iltvgc抗体能与纯化的his-gc蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gc蛋白。间接免疫荧光试验结果表明，所制备的兔抗iltv-ljs09gc蛋白的多抗能与iltvljs09、hlj0507、mdj0442、sd0203、zhj1298毒株反应，特异性良好。采用获得的抗gc抗体观测ljs09-gc蛋白在lmh细胞内的分布，发现gc蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上，细胞核和未感染的细胞中没有gc蛋白。利用抗体中和iltvgc蛋白的试验结果表明，gc蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播，从而影响病毒蚀斑的形成。本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗iltv-ljs09gc蛋白的多克隆抗体，并证实ljs09gc蛋白在分布及功能上具有α-疱疹病毒的保守性，为gc蛋白生物学特性和iltv感染机制的研究提供了重要数据。