羊口疮病毒orf125基因编码蛋白的结构预测及其在真核表达质粒转染细胞中的定位

？？旨在预测羊口疮病毒(orfv)orf125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位。设计引物pcr扩增orf125基因，并将其定向克隆至pegfp-n1真核表达载体，经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pegfp-orf125。利用dnastar和mega4.0元件分析不同毒株间orf125基因的遗传进化关系，接着通过在线expasy工具预测其二级结构并与bcl-2家族成员进行比较。利用脂质体介导法转染山羊皮肤成纤维细胞（gsfs），经dapi染色后在激光共聚焦显微镜下观察orf125的亚细胞定位。结果显示：本次克隆的orfvorf125基因与国外公布的其他羊口疮毒株核苷酸水平相似性为97.1%~98.1%，与同属另外2株羊伪牛痘病毒相比，核苷酸相似性分别为84.1%（gq329669）和85.6%（gq329670）；蛋白二级结构预测分析发现orf125与bcl-2家族成员α-螺旋位置相近，预测空间结构有很大的相似性；激光共聚焦显微镜观察发现orf125在gsfs细胞质中呈弥散性分布。结果提示，羊口疮病毒orf125基因非常保守，预测与bcl-2蛋白有着相似的功能，重组质粒pegfp-orf125构建成功，orf125基因在gsfs中得到表达，定位于细胞质中。