pegfp-htert转染鸡胚胎干细胞建系的研究

？本研究旨在通过构建重组质粒pegfp-htert转染鸡胚胎干细胞(chickenembryonicstemcells，cescs)，优化鸡胚胎干细胞培养体系，以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得htert基因后，构建重组质粒pegfp-htert，并利用fugene@hd转染鸡成纤维细胞(df-1)，转染24h后，荧光显微镜检测；再以80%brl-cm（大鼠肝细胞条件培养基）与20%的es基础培养液混合的条件培养基培养分离的cescs，添加10μmol？l-1维生素c，akp染色以及相关表面抗原ssea-1、sox2和oct4检测鉴定后，以g418筛选pegfp-htert转染的cescs，传代培养后荧光定量pcr检测相关干性基因的表达水平。结果表明：维生素c可以促进cescs增殖，pegfp-htert转染的df-1细胞中可以检测到绿色荧光表达，pegfp-htert转染的cescs可持续传至10代以上，且仍保持未分化状态，干细胞表面特异性抗原检测呈阳性，且相关干性基因的表达水平差异不显著（p>0.05）。综上表明：pegfp-htert转染的cescs在80%brl-cm结合外源因子的作用下，能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态，可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立。