猪精原干细胞体外分离培养及诱导分化的研究

？本研究旨在建立猪精原干细胞（porcinespermatogonialstemcells，psscs）体外分离和诱导分化，并探索psscs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离psscs和支持细胞（sertoli），采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性；传至3代后通过添加不同诱导剂，诱导sscs向脂肪细胞、神经元样细胞和成骨细胞分化，并通过生化染色、qrt-pcr和免疫细胞化学检测诱导效果。结果表明：分离得到的psscs在饲养层上生长良好，碱性磷酸酶（akp）及sox2、integrinα6、ssea1、dazl抗体鉴定均呈阳性，表明sscs处在未分化状态。诱导8d后，甲苯胺蓝染色及nse抗体鉴定成阳性，成功诱导sscs为神经元样细胞；诱导16d后，alp、vonkossa染色及collagonl抗体鉴定均呈阳性，诱导sscs为成骨细胞；诱导22d后，油红o染色可见脂滴被染成红色，诱导sscs成为脂肪细胞。在sscs诱导过程中，qrt-pcr结果显示，nestin和β-tubulin在6d左右表达量最高，cbfα1和osterix在12d左右表达量最高，pparγ和c/ebpα在18d左右表达量最高。本研究成功分离获得psscs，并且psscs可分别定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞，表达细胞特有标记基因。