基于基因c型鸭甲肝病毒vp1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体elisa检测方法的建立

？以纯化的基因c型鸭甲肝病毒(dhav-c)vp1重组蛋白作为包被抗原，建立检测dhav-c抗体的间接elisa方法。结果表明，试验的最佳条件：用ph9.6、0.05mol？l－1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg？ml－1，4℃包被过夜，抗体稀释度为1∶100，hrp酶标羊抗鸭igg稀释度为1∶5000，封闭液为含10%脱脂乳的0.01mol？l－1pbs，37℃封闭2h，血清稀释液为含1%bsa的pbs，抗体反应时间为60min，酶标羊抗鸭igg反应时间为30min，底物作用时间为15min，临界值为od450nm≥0.474。该方法重复性好，批内变异系数为2.03%~2.95%，批间变异系数为3.28%~7.38%，与鸭圆环病毒(ducv)、鸭乙型肝炎病毒(dhbv)、鸭瘟病毒（dpv）、新城疫病毒（ndv）、禽流感病毒（aiv）、鸭抗大肠杆菌、鸭抗金黄色葡萄球菌、鸭抗沙门菌、鸭抗禽多杀性巴氏杆菌以及鸭疫里默杆菌阳性血清无交叉反应，而与基因a型鸭甲肝病毒（dhav-a）阳性血清有交叉反应，表明该方法可以作为检测dhav-c和dhav-a抗体的通用elisa方法。与中和试验相比，阳性血清检测符合率为80%，阴性血清检测符合率为100%。初步临床应用表明：该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体消长的检测。本研究基于dhav-cvp1重组蛋白建立的间接elisa方法可用于基因a型和c型鸭甲型肝炎的血清流行病学调查和抗体检测。