tlr-4介导的鹅β-防御素1抗肠炎沙门菌感染的信号传导机制初探

？为研究鹅β-防御素1(avbd1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理，利用rt-pcr方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅avbd1基因片段，并将该基因亚克隆到原核表达载体pgex-6p-1的ecorⅰ和salⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pgex-gooseavbd1。将重组质粒转化大肠杆菌bl21，于37℃用iptg诱导表达，sds-page电泳表明，重组鹅avbd1蛋白在原核高效表达（相对分子质量约31ku）。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性。结果显示，鹅avbd1基因cdna片段大小为198bp，编码65个氨基酸残基。经相似性分析发现鹅avbd1氨基酸序列与鸵鸟avbd1氨基酸序列相似性最高，为77.1%，而且重组鹅avbd1蛋白具有广谱的抗菌活性，对12种细菌(包括革兰阳性菌和革兰阴性菌)均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅avbd1蛋白的抗菌活性，且该重组蛋白的溶血活性极低。试验表明，肠炎沙门菌确实会诱导鹅avbd1基因在鹅骨髓组织中的表达，说明鹅avbd1起到了抗肠炎沙门菌感染的作用，而这种作用有可能与tlr4介导的信号转导有关。