猪主要繁殖障碍疾病病原的多重实时定量pcr快速检测

？本研究旨在建立多重real-timepcr方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)、猪圆环病毒2型（pcv2）、猪伪狂犬病毒（prv）和猪细小病毒(ppv)。根据genbank数据库中prrsv、pcv2、prv、和ppv的核苷酸序列设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，检测系列稀释的纯化阳性质粒，建立检测prrsv、pcv2、prv和ppv的单项和多重real-timepcr方法。灵敏度和特异性试验结果表明，无论是单项和多重real-timepcr检测，该方法都具有高度特异性，与其它病原检测无明显交叉反应；对4种病毒的最低检测量为＜101拷贝或1tcid50，检测灵敏度比常规pcr高100倍。对40份临床样本进行检测，多重real-timepcr检测结果和单项real-timepcr检测结果完全一致。建立的同时检测prrsv、pcv2、prv和ppv的多重real-timepcr方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能对样品进行定量检测等优点。