莫氏巴贝斯虫裂殖子cdna表达文库的构建及免疫学筛选

？为了构建莫氏巴贝斯虫（babesiamotasi）裂殖子cdna表达文库，从中筛选和鉴定功能基因，利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子，提取总rna并纯化mrna。在合成的双链cdna两端加上含ecorⅰ和hindⅲ定向接头后连接到λscreen载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒，并用之转染er1647，构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cdna表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cdna文库，获得的阳性克隆，经过测序和blast软件分析鉴定，然后利用末端快速扩增技术（race）对筛选到的功能基因片段进行全长扩增。结果表明构建的cdna表达文库其初级库容量约为1.0×106pfu，扩增文库为3.5×109pfu；通过免疫学筛选，获得50个阳性克隆。测序和blast分析后，鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段，race扩增获得了其中8个基因的全长。本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cdna表达文库和筛选到的10个结构和功能基因，为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础。