基于狂犬病病毒重组蛋白的elisa检测方法比较研究

？原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(m)，并以此作为包被抗原建立间接elisa检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(p)作为包被抗原建立的间接elisa方法进行比较。根据genbank中公布的狂犬病病毒lep-flury株m基因序列设计特异性引物并引入smaⅰ和notⅰ酶切位点，经rt-pcr扩增得到目的基因，连接pcr？2.1载体，构建重组质粒pcr-rv-m，重组质粒用smaⅰ和notⅰ进行双酶切，酶切产物定向克隆至原核表达载体pgex-6p-1中，构建重组表达载体pgex-rv-m。将重组表达载体转化e.colibl21(de3)感受态细胞，使用iptg诱导表达目的蛋白，sds-page分析表明蛋白表达量较大，且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白，westernblot表明融合蛋白具有良好的反应原性，使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接elisa方法并检测了95份血清，同时使用带有his标签的重组狂犬病病毒磷蛋白p（rv-his-p）建立的elisa方法和商品化的elisa试剂盒检测该血清。结果表明：与商品化的以全病毒作为包被抗原的elisa检测试剂盒相比，使用重组p蛋白作为包被抗原建立的间接elisa检测方法具有更高的符合率，能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。