应用cre-loxp系统构建伪狂犬病病毒ge/tk双缺失株

？为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒（prv）ge/tk双缺失株，以prv-jsz株为亲本毒株，增强型绿色荧光蛋白（egfp）为报告基因，先构建出带有loxp位点的rprv-ge-/gfp，通过cre重组酶处理后，获得剔除egfp的ge单缺失株rprv-ge-；再以rprv-ge-为母本，以相同方法构建ge/tk双缺失株rprv-ge-/tk-。荧光检测和pcr结果显示成功构建了ge单缺失株和ge/tk双缺失株；病毒生长曲线测定可见rprv-ge-在pk15细胞上的增殖速度与野生株相似，而rprv-ge-/tk-较为缓慢；rprv-ge-/tk-对小鼠的半数致死量大于1×105tcid50，显著高于rprv-ge-和野生株；缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以cre/loxp系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株，为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。