利用诱导因子oct4、sox2和sv40t的mrna介导体细胞重编程研究

？为利用特定诱导因子oct4、sox2和sv40t的体外转录mrna实现安全的成纤维细胞重编程，本研究成功构建了特定诱导因子oct4、sox2和sv40t的mrna体外转录载体，并对体外转录mrna进行了5′和3′端加工修饰；进行了诱导因子mrna的293和imr90细胞转染试验，利用免疫细胞化学、免疫荧光和realtimepcr分别检测了oct4、sox2、sv40t和nanog的表达情况。结果显示，以上2种细胞以oct4∶sox2∶sv40t=2∶1∶1的mrna比例转染后均表达这3种特定诱导因子，且相应蛋白都正确地定位在细胞核上。转染细胞中oct4和nanog的表达都特异性地增高。结果提示，3种诱导因子的体外转录mrna能够在体内协同作用，激活细胞内源性干性标志基因nanog的表达，为开启重编程过程奠定了坚实的基础。