版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究

？本研究旨在获得版纳微型猪近交系(bmi)生长激素基因编码区序列，揭示其原核表达规律。采用rt-pcr方法从版纳微型猪近交系(bmi)脑垂体中克隆生长激素(gh)基因，并将其连接到pmd18-t载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的gh基因cdna序列长690bp，其中cds长651bp，编码216个氨基酸，前26个氨基酸为信号肽序列。多猪种gh氨基酸序列比对表明其在各猪种中高度保守，版纳微型猪近交系的gh氨基酸序列与五指山猪和宁香猪的相似性均为100%，与藏猪、香猪、大乌猪、太湖猪、成华猪、内江猪、荣昌猪、长白猪、约克夏的相似性均为99%，与雅南猪、杜洛克的相似性均为98%。扩增gh成熟肽区编码序列，定向克隆至表达载体pet-32a(+)，转化入大肠杆菌rosseta(de3)感受态细胞中，用iptg诱导表达蛋白。sds-page和westernblotting分析表明，重组质粒在大肠杆菌中获得了高效表达，融合蛋白以包涵体形式存在，分子质量约为40.6ku。以上结果为进一步探究gh基因对bmi矮小性状的影响奠定了基础。