布鲁菌糖基转移酶对细胞炎症反应的影响

？本研究旨在研究布鲁菌糖基转移酶（wboa）在诱发胚胎滋养层细胞（htp-8）炎症反应中的作用。以羊种布鲁菌m5-90为模板，扩增wboa基因，构建pet28a(+)-wboa重组表达质粒，转化重组质粒在bl21(de3)中表达，通过sds-page和westernblot鉴定，并对重组wboa蛋白进行纯化。构建自杀载体pgem-7zf-δwboa-sacb，通过同源重组的方法，筛选布鲁菌wboa基因缺失株δwboa，并进行pcr鉴定和遗传稳定性检测。然后将纯化的wboa蛋白与δwboa分别作用于胚胎滋养层细胞，elisa检测il-6、il-10、tnf-α和乳酸脱氢酶（ldh）的相对变化量。结果成功纯化了wboa蛋白，构建了δwboa，δwboa侵染胚胎滋养层细胞诱导产生炎症细胞因子il-6、il-10和tnf-α均低于m5-90对照组，差异显著（p<0.05），wboa蛋白作用胚胎滋养层细胞时，炎症细胞因子il-6、tnf-α和ldh均高于pbs对照组，差异极显著（p<0.01）。本研究表明wboa蛋白具有细胞毒作用,布鲁菌的致炎作用与脂多糖o链相关，为进一步阐明布鲁菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。