非肌肉肌球蛋白ⅱ型重链a羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染marc-145细胞中的作用

？前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（prrsv）gp5蛋白的抗独特型抗体特异性结合marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白ⅱ型重链a（nonmusclemyosinheavychainⅱ-a，nmhcⅱ-a）蛋白，其结合位点位于nmhcⅱ-a的羧基端。本研究通过真核表达nmhcⅱ-a的羧基端（pra）蛋白，验证其对prrsv感染marc-145细胞的作用。通过bac-to-bac杆状病毒表达系统表达pra蛋白。westernblot和间接免疫荧光鉴定pra蛋白的表达及其与marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量pcr检测pra蛋白对prrsv感染marc-145细胞的作用。westernblot和间接免疫荧光结果表明，pra蛋白在真核细胞中得到成功表达，其最高表达量为接种1个moi杆状病毒后96h时。pra蛋白特异性结合marc-145细胞，使prrsv感染marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的nmhcⅱ-a羧基端蛋白能特异性结合marc-145细胞并有效降低prrsv的感染。这些结果为进一步阐明nmhcⅱ-a在prrsv感染细胞过程中的作用提供了新的依据。