乙型脑炎病毒贵州分离株e基因原核表达及其免疫原性的研究

？收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料，处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合rtpcr方法分离鉴定，命名为乙型脑炎病毒(jev)贵州分离株（gz株），然后根据genbank登录的日本乙型脑炎病毒sa14和sa14142株全基因序列设计并合成1对扩增e基因的特异性引物,用rtpcr方法扩增出jev贵州分离株e基因，并将e基因克隆到pmd19t载体上，构建重组质粒pmd19te，经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后，再将e基因亚克隆到pet32a(+)原核表达载体上，成功构建乙脑病毒e基因原核表达质粒pet32ae，将构建好的原核表达质粒pet32ae转化至宿主菌bl21（dh3）中，诱导表达目的蛋白，表达产物经sdspage电泳和westernblot分析，得到了约59ku条带，与预期大小相符，进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白，并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠，免疫后采血检测抗体。结果显示：乙型脑炎病毒贵州分离株e基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平，该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。