携带猪传染性胃肠炎病毒s/n融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定

？旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒（tgev）s/n融合双基因的减毒沙门氏菌，并鉴定该疫苗菌株的生物学特性，为开展tgev口服免疫研究奠定材料基础。采用pcr方法从克隆质粒19ts和19tn中分别扩增了tgev的s基因（含主要抗原位点，2.1kb）和n基因(1.2kb)，将s基因和n基因插入pvax1载体,构建携带s/n融合双基因的真核表达质粒pvaxs/n。将pvaxs/n电转化减毒沙门氏菌sl7207,筛选获得重组菌株sl7207(pvaxs/n)，并对重组菌株sl7207（pvaxs/n）的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明，真核质粒pvaxs/n构建成功，该质粒转染cos7中能表达2个目的蛋白，重组菌sl7207(pvaxs/n)在kan+抗性下体外培养稳定性好，口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录，以0.5×109、1×109和2×109cfu口服对小鼠均具有安全性，重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建tgevs/n双基因疫苗sl7207(pvaxs/n)，该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点，为开展tgev口服免疫研究奠定了基础。