猪繁殖与呼吸综合征病毒gp3/gp5/m真核表达载体的构建及其体液免疫应答

？本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（prrsv）gp3、gp5和m蛋白的真核重组质粒。以prrsvln株为模板，采用pcr方法扩增出gp3、gp5、m基因片段，将扩增的gp5、m通过linker序列串联成gp5m，然后将gp3与gp5m双酶切后插入pcdna3.1（+）构建重组质粒pcdna3.1gp3gp5m，将其转染cos7细胞。pcr鉴定表明重组质粒pcdna3.1gp3gp5m含有prrsvgp3、gp5m基因，间接免疫荧光检测表明gp3、gp5m蛋白在cos7细胞内获得表达。westernblotting检测证实gp3、gp5、m蛋白获得正确表达，并且所表达的gp3、gp5、m蛋白是融合蛋白。将pcdna3.1gp3gp5m免疫balb/c小鼠，首免后2周可检测到特异性prrsv中和抗体，首免后8周中和抗体效价最高可达1∶32。进一步将pcdna3.1gp3gp5m免疫断奶仔猪，首免后4周即可产生1∶4～1∶8的中和抗体。本试验成功构建了表达prrsvgp3、gp5和m融合蛋白的真核重组质粒pcdna3.1gp3gp5m，中和抗体检测表明pcdna3.1gp3gp5m具有良好的免疫原性，从而为prrsv基因工程疫苗的研制奠定基础。