mir200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mrna表达的影响

？旨在构建padprimir200a重组腺病毒，使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达mir200a，研究mir200a对乳脂合成相关基因mrna表达的影响。以西农萨能羊dna为模板扩增primir200a。采用adeasy系统构建重组腺病毒载体padprimir200a,并于hek293细胞株中进行病毒的包装、扩繁。tci50法测定病毒滴度。qrtpcr检测mir200a及16个乳脂合成相关基因mrna表达水平。序列分析结果显示，primir200a包括premir200a86bp和侧翼序列共297bp。酶切结果证实padprimir200a构建成功。adprimir200a滴度达8×109pfu·ml-1。实时定量结果表明，adprimir200a（moi为200）感染奶山羊乳腺上皮细胞72h，mir200a的表达量较对照高出2.4倍。同时mir200a的过表达引起10个基因mrna表达量下调，6个基因mrna表达量上调。其中脂肪酸从头合成相关基因fasn、脂滴生成相关基因tip47及脂肪酸运输相关基因fabp4降幅较大，分别下降了0.47、0.89及0.65倍。而tag生成相关基因dgat1和脂解相关基因hsl较对照分别增加了0.52和1.49倍。本研究获得的重组腺病毒adprimir200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达mir200a，同时mir200a过表达影响乳脂合成相关基因mrna表达水平。