鸭肠炎病毒gd基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位

？以本实验室获得的鸭肠炎病毒(dev)c-kce株us区基因序列(genbank登录号eu714267)为基础pcr扩增出gd基因胞外区(gdw)，将其定向克隆至原核表达载体pet-30a(+)并转化至大肠杆菌rosettatm(de3)plys。经iptg诱导表达，sds-page分析表明gd基因胞外区在大肠杆菌中获得与预期大小相符的表达蛋白。重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，血清琼扩效价达1∶16，噬斑减数中和试验测定血清中和抗体效价达1∶64。通过免疫荧光技术首次对gd进行亚细胞定位检测,结果表明dev感染鸭胚成纤维细胞(def)后4h近核区域细胞质内首先开始出现荧光,12h以后显著增加，明显的点状绿色荧光广泛存在于胞质中。本研究为进一步开展devgd的功能研究提供了重要数据和材料。