山羊c-myc原癌基因原核表达和多克隆抗体的制备

？c-myc原癌基因与胚胎干细胞（es细胞）和诱导的多能性干细胞（ips细胞）生物学特性密切相关，因此制备其相应的多克隆抗体尤为必要。本研究以pmd18t-myc质粒为模版，pcr扩增c-myc片段，然后将其亚克隆到pse380表达载体上，获得pse380-myc重组质粒。该质粒转化工程菌bl21(de3)，iptg诱导表达hismyc融合蛋白,随后用sds-page电泳及westernblot加以验证。在变性条件下用ni-ntaargrose介质分离纯化his-myc融合蛋白，并以此为抗原免疫新西兰大白兔。经过4次免疫，采集血液、分离血清，用westernblot检测抗体特异性。结果表明：（1）pse380-myc重组质粒在工程菌bl21(de3)得到了高效表达；（2）得到了高纯度高含量的his-myc融合蛋白；（3）经wsternblot检测发现，c-myc多克隆抗体与his-myc融合蛋白能够特异性结合。本研究获得的特异性山羊c-myc多克隆抗体，为进一步研究山羊es细胞和ips细胞的自我更新机制奠定了基础。