徐淮山羊hfabp基因克隆、表达产物亚细胞定位的研究及转基因小鼠的制备

？旨在克隆徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(hfabp)基因的cdna，探讨其生物信息学功能。通过egfp融合蛋白对该基因亚细胞水平的表达定位，探究该基因在异种生物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性。采用反转录pcr(rtpcr)方法克隆徐淮山羊hfabp基因cdna，进行生物信息学分析，构建其融合表达载体pegfphfabp。脂质体(ltx)介导基因转染山羊成纤维细胞（gef），48h后进行荧光检测，rtpcr检测mrna在细胞内的表达。利用睾丸注射将目的基因转入小鼠体内，在dna和蛋白水平上检测目的基因的表达情况。结果，徐淮山羊hfabp基因完整编码区(cds)大小为402bp，编码133个氨基酸,genbank登录号为ay466498.1。徐淮山羊hfabp序列与人、鸡、褐家鼠、奶牛、野猪、驴及斑马鱼相应编码区同源性为89%、76%、85%、84%、93%、91%、70%，氨基酸序列同源性为90%、79%、88%、97%、95%、94%、72%。成功构建融合表达载体pegfphfabp，目的基因在mrna水平上成功表达。目的蛋白定位于细胞质中,与在线预测结果相同(无信号肽,定位于细胞质中)。通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内实现暂态表达和持续性表达。本研究成功克隆了徐淮山羊hfabp基因cdna，而且hfabp基因在进化过程中是保守的。该蛋白无信号肽，在单细胞水平上可表达于细胞质中，在小鼠体内也可以成功表达。