兔支气管败血波氏杆菌prn基因缺失突变株的构建及特性研究

？利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素（prn）缺失突变株以研究prn在支气管败血波氏杆菌（bb）致病机理中的作用，同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。pcr扩增出prn1（prn上游基因）和prn2（prn下游基因）2个目的基因片段，运用基因重组技术将庆大霉素抗性基因(gm)连接到prn1和prn2之间，将连接好的基因片段克隆到pmeg375自杀性载体中，构建自杀性载体pmeg375prn1gmprn2，将其转化到宿主菌sm10中，通过宿主菌sm10与受体菌bb固相滤膜交配，自杀性载体转移到受体菌，根据同源重组原理，抗性筛选得到基因缺失突变株，命名为bb（△prn）。对突变株bb（△prn）与野生株wt进行了遗传稳定性、生长特性、溶血特性、细胞黏附特性、毒力、免疫保护性等比较研究。结果表明：bb（△prn）具有遗传稳定性；与野生株相比，突变株生长速度较慢，毒力有所下降，溶血活性及对hep2细胞的黏附能力没有明显变化；小鼠免疫原性试验结果显示，突变株免疫小鼠后可以产生强有力的免疫力，能够抵抗野生株的攻击。bb（△prn）突变株构建成功并具有良好的免疫原性，为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究奠定了基础。