鹅pit1基因启动子区转录调控的研究

？为研究垂体特异性转录因子(pituitarytranscriptionfactor1,pit1)启动子的转录调控机制，寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位。利用前期染色体步移技术扩增得到鹅pit1基因的启动子区序列，经pcr扩增，定向亚克隆至荧光素酶表达载体pgl3basic中，把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体（pglbasic），制备了一系列启动子缺失体（-1485/-1bp、-1293/-1bp、-1014/-1bp、-775/-1bp、-561/-1bp、-353/-1bp和-206/-1bp），并通过限性内切酶酶切、pcr及测序进行鉴定，构建了含有正确目的基因的报告基因重组体，然后瞬时转染gh3细胞，利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。本试验所克隆的pit1基因启动子区具有明显的启动子活性，其中-561/-1bp的启动活性最强，该区域存在有pit1、pou3f2、myogenin和gr等多个转录因子结合位点。利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体，并且验证了克隆的启动子具有启动活性，找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。