piggybac转座子介导的转fgf5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备

？本研究旨在建立可稳定表达fgf5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用rt-pcr方法，从陕北白绒山羊皮肤组织cdna中克隆fgf5s基因，构建pb转座子介导的真核表达载体pb-egfp-fgf5s；在脂质体的介导下，将pb-egfp-fgf5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞，通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用pcr和rt-pcr鉴定fgf5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明，成功克隆了陕北白绒山羊fgf5s基因并构建了pb-egfp-fgf5s真核表达载体；pcr结果显示，fgf5s已整合到细胞基因组中；rt-pcr结果表明，该基因在转录水平上表达。另外，转染试验表明pb转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法，并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。