鸭脂联素基因全长cdna的克隆和原核表达的研究

？本研究旨在通过克隆鸭脂联素(adiponectin)基因序列并进行序列分析，揭示该基因的序列特征、组织特异性表达规律，并对其进行原核表达。采用rt-pcr、5′-race和3′-race的方法从鸭脂肪组织总rna中扩增脂联素基因cdna片段；半定量rt-pcr检测组织表达特异性；构建原核表达载体，建立原核表达体系。从鸭脂肪组织中得到3个脂联素基因cdna片段，克隆测序后，拼接获得了鸭脂联素基因1374bp全长cdna序列，其包含一个长度为738bp完整的开放阅读框，编码245个氨基酸；编码区与鹅、鸡脂联素基因序列的同源性分别为94.9%和86.0%，与人、小鼠、狗等物种脂联素基因的同源性在64.2%~67.0%之间；氨基酸序列比较可知，鸭与鹅、鸡的脂联素氨基酸的同源性分别达95.5%和84.0%，与人、小鼠、狗等哺乳动物的同源性在65%左右。半定量rtpcr研究结果表明脂联素基因在所测组织中均表达，且高度表达于脂肪组织、肌胃、小肠、心和骨骼肌，中度表达于肺、腺胃、卵巢和脾组织中，而在肝、肾和间脑中低度表达。构建得到在其c端含有8个组氨酸的鸭脂联素融合蛋白表达载体pet41a-duck-adp，重组表达质粒转入bl21（de3）大肠杆菌中表达，经iptg诱导后并sds-page检测获得了30ku的鸭脂联素原核表达蛋白。脂联素基因在动物进化中具有一定的保守性，该基因在不同组织中表达水平不同，通过原核表达可获得鸭脂联素的重组蛋白。